Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失去甲自身病原锥体到消失1同型肾病诊断病因的十分困难率在学童时期就有更好的叙述，多个去甲自身病原锥体HIV的学童当除此以外70%在血清转换后10年内患上肾病，而随访15年的学童这一数目减小到84%。相比之下之下，%诊断1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的肺癌机制还无法获取充分的研究成果。

越来越为多的人开始适用分期系统来定义1同型肾病的十分困难：个锥体在消失多种去甲自身病原锥体时进入第1阶段，消失血糖异常时进入第2阶段，消失病因时进入第3阶段。一些多发去甲自身病原锥体HIV的个锥体，在1期和2期，十分困难较太快，并发展为肺癌的1同型肾病。我们以前叙述了一两组在首次检测到多种去甲自身病原锥体抽样后大概10年无肾病的近于太快十分困难者，这两组病症次数不算，但特点更为明确。随后，我们发现去甲自身抗原特异性CD8+T蛋白质反其所在十分困难缓太快的病症当中基本不存在，但在早先肺癌和则有的肾病病症当中很容易检测到。这意味著声称，与十分困难病症相比之下，这些病症免疫性反其所的调节增强。

越来越早研究成果声称，尽管调节性T蛋白质(Treg)量正常，但肾病病症存在一些功能有缺陷，其当中包括对IL-2的反其所战斗能力降低。此外，肾病病症当中的震荡CD4+T蛋白质意味著对调节近于具抵抗性，表现为震荡T蛋白质的可抑制移向，自然造成了的Treg和锥体外造成了的可借Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质当中IL-2反其所移向。本研究成果的目的是叙述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群近于缓太快十分困难者当中的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁以下肺炎的病症亲戚当中检查1同型肾病的危险因素。我们以前叙述了近十年缓太快十分困难者的特点，他们保持多重去甲自身病原锥体HIV多达10年，但无法消失肾病的诊断病因，太快性或非透过性免疫性。随后，10名继续保持无肾病并愿意备有大量肾脏抽样的缓太快十分困难者纳入T和B蛋白质功能统计分析。在迄今的研究成果当中，8名太快十分困难者(SP两组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的去甲自身病原锥体HIV。所有的参与者都处于1同型肾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身病原锥体对某些抗原的HIV反其所，然而，一名病症已经处于2期大概6年，但无法消失诊断病因，一名病症被诊断为肾病，该受试者72岁，在搜集检验抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析当中对该NADP透过了单独分析报告。分离外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质拳法和T蛋白质可抑制试验分析报告NADP当中Treg的振幅、表同型和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、连续性和回归)透过无监督聚类统计分析，分析报告Treg表同型。

结果：与有益NADP相比之下，来自太快十分困难锥体的遗忘CD4+T蛋白质的监督聚类说明了，抑制的遗忘CD4+ Treg振幅减小，与两组胺可借的TNFR就其蛋白(GITR)表达出来减小有关。一名HbA1c升高的病症与十分困难缓太快者和匹配的比对两组相比之下，Treg谱有所不同。功能统计分析声称，与有益NADP相比之下，来自缓太快十分困难锥体的Treg介导的CD4+震荡T蛋白质可抑制明显受损。表现为对震荡CD4+T蛋白质CD25和CD134表达出来的可抑制减小。

平面图1 深入的表同型统计分析说明了，CD4+Treg亚同型在太快十分困难字段当中减小。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据上面物表达出来鉴定出10个元簇:遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个不同Treg上面聚合的10个元簇的MST。每个路由都有一个集群(100个集群)，越来越大的元集群(10个元集群)在路由两组周围上色。每个路由当中的饼平面图对此单个上面的表达出来级别。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整锥体上面表达出来。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)聚合平面图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较丰度为每个metacluster箱支线平面图(丰度> 0.05%)断定为HD和SP两组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白质(l)。橘色红色都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一两组符号秩检查。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 适用CITRUS的预测模同型证实，Treg振幅的减小是十分困难缓太快的标志。国际标准去近于化(a - f)和柑桔统计分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的都有性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR表达出来透过分离，模拟FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(布氏)两组以及NADPSP 606(橘色)当中CD25+ cd127的振幅统计平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去近于化子集的箱支线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来其中心着色，箭头突出的簇被比对为SP和HD字段错综复杂的不同。(j)箱支线平面图说明了了在SP(布氏)和HD(灰点)两组当中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相较丰度(数目)。(k)直方平面图说明了每个簇的表同型(粉红色)和Treg上面相较表达出来与背景表达出来(橙色);上列，闪存Treg_3;下面正要，闪存Treg_4。背景与所有其他簇当中上面的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一两组符号秩检查

平面图3 与有益献血者相比之下，十分困难缓太快者遗忘treg的GITR减小。每个遗忘CD4+T蛋白质元簇(遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表达出来上面的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的表达出来热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表达出来串联，说明了直方平面图(c)和统计平面图(d)。Wilcoxon一两组符号秩和检查，p< 0.07(橘色)所有NADP包括，p< 0.05(橙色)NADPSP 606和匹配的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表达出来，从国际标准去近于化，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橘色)串联，说明了直方平面图(e)和统计平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一两组符号秩检查

平面图4 来自缓太快十分困难的CD4+ treg蛋白质掌控震荡CD4+T蛋白质的战斗能力降低。SP两组用橙色的支线和红色对此，HD两组用银色的支线和红色对此，橘色的支线/红色对此NADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质透过分选。CD4+CD25−(其所答者)被上面为CFSE, Treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，培训3在此之后透过流式蛋白质拳法检测。(a-d)与CD4+其所答者相较其所的treg培训(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD其所答者培训。(a,b,f) CFSE可借(a,e)和CFSE可抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比率。适用HIV比对(抑制的响其所蛋白质则有treg)计算可抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 震荡CD4+T蛋白质对缓太快十分困难的T蛋白质再造的可抑制越来越敏感。SP两组用橙色的支线和红色对此，HD两组用银色的支线和红色对此，橘色的支线/红色对此NADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质透过分选。CD4+CD25−(其所答者)被cfsel上面，treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，培训3在此之后透过流式蛋白质拳法(CD25反染)和蛋白质因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606其所答者共同培训。(a,b) CFSE可借(a)和CFSE可抑制百分率(b)。(c,d) CD25可抑制百分率(c)和CD134可抑制百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训当中的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们算出的推论是，来自缓太快十分困难子的再造遗忘CD4+Treg在GITR表达出来当中获取了扩展和非常丰富，强调了必要性研究成果Treg在1同型肾病风险个锥体当中的异质性的必要性。

原文其所是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28